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豬ELISA檢測(cè)試劑盒在實(shí)驗(yàn)中一定要多注意以下事項(xiàng)

發(fā)布時(shí)間:2020-06-26   點(diǎn)擊次數(shù):2249次
  豬ELISA檢測(cè)試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理:
  用純化的抗體包被微孔板,制成固相載體,往包被抗該指標(biāo)抗體的微孔中依次加入標(biāo)本或標(biāo)準(zhǔn)品、生物素化的抗該指標(biāo)抗體、HRP標(biāo)記的親和素,經(jīng)過(guò)*洗滌后用底物TMB顯色。TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成的黃色。顏色的深淺和樣品中的該指標(biāo)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),計(jì)算樣品濃度。
 
  豬ELISA檢測(cè)試劑盒的樣品收集、處理及保存方法:
  1、血清:操作過(guò)程中避免任何細(xì)胞刺激。使用不含熱原和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,10×g離心10分鐘將血清和紅細(xì)胞迅速小心地分離。
  2、血漿:EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測(cè)。1000×g離心30分鐘去除顆粒。
  3、細(xì)胞上清液:1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。
  4、組織勻漿:將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液
  5、保存:如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70 ℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測(cè)前先離心或過(guò)濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。
 
  注意事項(xiàng):
  1、嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
  2、洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
  3、消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
  4、底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
  5、避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
  6、在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
  7、平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
  8、任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
  9、不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
  10、如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。
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