葡萄糖-6-磷酸酶測試盒操作步驟
產品說明: 葡萄糖-6-磷酸酶((glucose 6 phosphatase,G6Pase,EC 3.1.3.9)是一種水解磷酸化合物的磷酸酶,廣泛存在 于動物、植物、微生物和細胞中,是糖異生過程水解葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖的限制酶,在保證血糖的動態(tài)平衡方面起著重要的作用。
G6P催化葡萄糖-6-磷酸生成葡萄糖和無機磷,利用鉬藍法測定無機磷含量的增加,即可反映G6P活性。
注意:實驗之前建議選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預實驗。如果樣本吸光值不在測量范圍內建議稀釋或者 增加樣本量進行檢測。
需自備的儀器和用品: 可見分光光度計、低溫臺式離心機、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調式移液qiang、研缽/勻漿器、EP管、冰和蒸 餾水。
樣本處理
1、細菌或培養(yǎng)細胞:先收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數(shù)量(104 個):提取 液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 提取液),超聲波破碎細菌或細胞(冰浴, 功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復 30 次);8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
2、組織:按照組織質量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液), 進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
3、血清(漿)樣本:直接檢測。